Medio de cultivo PDA

Ingredientes para 1 litro de PDA:

  • 1000 ml de agua destilada
  • 250 g de patatas lavadas (sin pelar)
  • 30 g de agar-agar en polvo
  • 15 g de dextrosa (miel, azúcar, panela, sirope de maíz, sirope de arce, …)
  • Alcohol 70º
  • Agua oxigenada (comercial, 10 vol. es suficiente)

Herramientas y utensilios necesarios:

  • Placas de Petri, envases pequeños para el cultivo también valen
  • Envases que soporten el calor con sus respectivas tapas (tarros de cristal, polipropileno PP5, matraz, etc)
  • Balanza para pesaje de los ingredientes
  • Cuchillo para cortar las patatas
  • Cinta microporosa

Si eres menor de edad debes realizar los experimentos acompañado de un adulto

En este vídeo podrás ver paso a paso la receta

¿QUÉ ES UN MEDIO DE CULTIVO PDA?

Es un gel nutritivo compuesto por patata, dextrosa y agar. Este sirve de alimento a muchos tipos de microorganismos, en nuestro caso lo queremos para desarrollar hongos, ya sea partiendo de tejido fresco, esporas o micelio.

¿CÓMO SE HACE?

Existen diferentes recetas y preparados comerciales de laboratorio listos para usar, pero si lo que quieres es hacerlo tú mismo aquí viene mi receta personal. Arriba tienes los ingredientes y utensilios que vamos a usar.

  1. Lo primero que debemos asegurarnos es de tener la máxima asepsia posible en todas partes y en todos los procesos que realizaremos. Es importante comenzar usando cubrebocas y lavarnos las manos además de rociar alcohol en estas cada vez que toquemos algo sensible (las placas de Petri, introducción del gel nutritivo en las placas, inoculación del medio con el hongo o manipulación de las placas para incubar).
  2. Vamos a lavar concienzudamente con agua las patatas (unos 250 g) para eliminar tierra que pudieran tener las mismas, a continuación las cortaremos en trozos de entre 3 a 5 cm y las pondremos a hervir en agua destilada (1000 ml) durante 45 minutos para obtener un caldo de patata (no puré). Una vez transcurrido este tiempo colaremos el caldo para conseguir que quede solo el líquido.
  3. Vamos a introducir este caldo en varios botes de 500 ml por ejemplo, no les vamos a llenar hasta arriba, para evitar que se derrame durante la esterilización, por ello solo les llenaremos hasta 3/4.
  4. Dispondremos de 30 g de agar agar y 15 gramos de dextrosa que vamos a repartir entre los 3 tarros a razón de 10 g de agar y 5 de dextrosa en cada uno. Cerramos con su respectiva tapa y agitamos durante un minuto para que se homogenice la mezcla. Si realizamos este paso mientras el caldo de patata está aún caliente se disolverán los ingredientes mucho mejor.
  5. Una vez listo el punto 4 vamos a proceder a esterilizar nuestro medio de cultivo. En una olla exprés pondremos en el fondo una placa metálica o unos trapos viejos para evitar que nuestros tarros de vidrio estén en contacto directo con el fondo de la olla y estallen. Si disponemos de autoclave el tiempo de esterilizado será de 20 minutos (121ºC 15 psi), de lo contrario si nuestra olla es de cocina entonces lo tendremos 40 minutos desde que la olla comienza a echar vapor. Apagamos el fuego y dejamos enfriar hasta que pierda presión.
  6. Es importante saber que el medio de cultivo comienza a solidificarse cuando desciende de 40ºC, por eso es recomendable trabajar con el PDA aún caliente. Pueden usar cualquier recipiente estéril, personalmente uso placas de Petri que esterilizo antes de usar. Un excelente tip para evitar contaminación es, a parte de esterilizar, echar un poco de agua oxigenada en cada placa de Petri moviéndolas para que esa pequeña cantidad bañe todo el interior. Después echamos un poco de medio de cultivo (10 ml por placa) tapamos y dejamos enfriar. El peróxido no interviene en el crecimiento de los hongos, con lo cual no es necesario retirarlo. Tengamos en cuenta que con 1000 ml de PDA podemos ocupar 100 placas de Petri de 90 x 14 mm. No debemos malgastar…
  7. Una vez listas las dejamos enfriar hasta que solidifique completamente el medio (yo las dejo un par de horas).
  8. En caso de que te sobre PDA lo puedes congelar para ocuparlo hasta 6 meses después, siempre volviendo a esterilizar de nuevo.
  9. Ahora toca inocular las placas, pero eso ya es otro post!

6 comentarios

  1. Hola Javi! Primero quiero hacerte llegar mi saludo y felicitaciones por el increible proyecto que has creado y darte las gracias por todos tus aportes de divulgación y enseñanza!
    Quería preguntarte cuanto tiempo aguanta la capsula colonizada en la heladera. Un saludo desde Argentina!

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